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特異性免疫球蛋白 Y 治療急慢性咽炎的療效觀察

謝民強　蒙永祥 　李仲漢 　李永奇 　張扣興 　趙曉明 　熊國軍 　陳勇明

     【摘要】　目的　評價特異性免疫球蛋白 Y 治療急慢性咽炎的有效性和安全性。 方法　50 例單獨接受特異性免疫球蛋白 Y 噴劑或同樣劑量安慰劑治療的成人急性咽炎采用隨機雙盲、安慰劑對照分組;另外急、慢性咽炎各25 例開放試驗組單獨接受特異性免疫球蛋白 Y 噴劑治療。 療程均為 7 d,急性咽炎治療 3 d 后如癥狀無改善或加重者視為無效, 并加用抗生素治療。 以癥狀、體征記分, 按顯效、有效、無效評價療效。 結(jié)果　雙盲組中, 接受 IgY 治療患者顯效 8 例(32%), 有效 13 例(52%), 無效 4例(16%);安慰對照者顯效 2 例(8%), 有效 5 例(20%), 無效 18 例(72%), 兩組比較差異有非常顯著性(χ2 =16.06, P<0.01)。 開放試驗組中, 顯效 19(38%)例, 其中急性占 14 例, 有效 23(46%)例, 急性占 10 例, 無效 8(16%)例, 急性占 1 例, 急慢性兩組比較療效差異有顯著性。(χ2=8.90, P <0.05), 隨訪 3個月未發(fā)現(xiàn)毒副作用及過敏反應(yīng)。 結(jié)論　特異性 IgY 口腔噴劑治療急慢性咽炎安全、有效, 對急性咽炎的療效優(yōu)于慢性咽炎。

     【關(guān)鍵詞】　咽炎;　免疫球蛋白類;　隨機對照試驗;　革蘭氏陽性菌

Effect of specific immunoglobulin Y in the treatment of acute and chronic pharyngitis 　XIE Min-qiang＊ ,MENG Yong-xiang , LI Zhong-han, LI Yong-qi , ZHANG Kou-xing , ZHAO Xiao-ming,XIONG Guo-jun, CHEN Yong-ming＊Department of Otorhinolaryngology , Third AffiliatedHospital, Sun Yet Sen University , Guangzhou 510630 , ChinaCorresponding author:XIE Min-qiang, Email :min_qiang_x @hotmail.com

    【Abstract】　Objective　To evaluate the effect and safety of the specific immunoglobulin Y (IgY)fortreatment of acute and chronic pharyngitis.Methods　Double-blind, randomized, placebo-controlled trialwas conducted on 50 adults with acute pharyngitis.Experimental group received a 6 times-daily total 30doses of IgY stomat-spray which contained specific immunoglobulin Y (titer=512)prepared from the eggyolk of hensimmunized with a variety of bacteria.Another open label trial included 50 patients, whose agesranged from 21-69 years, including 25 cases of acute pharyngitis and 25 cases of chronic pharyngitis werealso treated using gYstomatspray.Thetherapeutic effect were objectively evaluated 7 days later by thedecreased scores based onboth the symptomsandphysicalsigns.If the symptom did not improve or becamesevere three days later, these patients with acute pharyngitis wasinefficiency and antibiotic medicine would be added to them.Results　In Double-blind trial, 8 cases(32 %)received IgY had apparent effect with the decreased scores 5 or more than 5, 13 cases(52%)had effective with the decreased scores 3-4, and other 4 cases(16%)had inefficacy with the decreased scores only 2 or no more than 2.While in placebo-controlled group, only 2 (8 %)cases had apparent effect, 5(20%)casesshowed effective and 18(72%) cases had noeffect.The difference between the two groups was significant (χ2=16.06, P <0.01).Inopen label trial, 19 cases(38%)showed apparent effect, in which 14 cases were acute pharygitis.23 cases(46%)had effective, in which 10 caseswere acute pharyngitis.The left 8 cases(16%)hadineffective, inwhich one case was acute pharyngitis.There was significantly difference (χ2=8.90, P <0.05)betweenacute pharyngitis and chronicpharyngitis.An average of three months followup showed that there were noside effect or toxic effect and no allergic reaction.Conclusion　The IgY stomat -spray is a safe and effective agent in treating acute and chronic pharyngitis, especially for acute pharyngitis.

作者單位:510630 廣州, 中山大學附屬第三醫(yī)院耳鼻咽喉科(謝民強、李仲漢、李永奇);廣東省大日生物化學藥業(yè)有限公司(蒙永祥);廣州中山大學附屬第三醫(yī)院呼吸內(nèi)科(張扣興);暨南大學醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院耳鼻咽喉科

(趙曉明、熊國軍);廣東省順德市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科(陳勇明)

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中華耳鼻咽喉科雜志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2

　　【Key words】　Pharyngitis;　Immunoglobulins;　Randomized controlled trials;　Gram-positive

bacteria

　　   急慢性咽炎是耳鼻咽喉科常見病, 部分為細菌感染引起,也與局部免疫狀態(tài)有關(guān)。雖然急性期應(yīng)用抗生素治療有肯定的效果, 但本病常反復(fù)發(fā)作, 而且轉(zhuǎn)變?yōu)槁詣t治療十分棘手 。我們自 2002 年 7月開始采用抗生素替代物———特異性免疫球蛋白 Y口腔噴劑治療急慢性咽炎 ,效果滿意,報告如下。

資料與方法

        一 、病例資料

        2002 年 7 月 ～ 2003 年 4 月中山大學附屬第三醫(yī)院耳鼻咽喉科 、暨南大學醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院耳鼻咽喉科和廣東省順德市人民醫(yī)院耳鼻咽喉科門診志愿受試患者, 所有納入病例半月內(nèi)未用抗生素, 不伴急性化膿性炎癥, 體溫不超過 38℃。除耳鼻咽喉常規(guī)檢查外 ,加作血常規(guī) 、X 線胸部透視和咽拭子細菌培養(yǎng) ,排除其他特殊感染,X 線胸部透視異常者不進入研究,總共 110 例 。其中 8 例在規(guī)定復(fù)查時間內(nèi)失訪,2 例自行合用了其他藥而退出研究, 實際完成試驗 100 例。急性發(fā)病 ,以咽痛為主 ,檢查見咽黏膜急性充血或伴水腫 、潰瘍者診斷為急性咽炎 ;慢性起病 ,咽異物感 、多痰 、咽癢、咽干、輕微咽痛, 檢查見咽黏膜慢性充血 、表面黏液附著或淋巴濾泡增生者則診斷為慢性咽炎。50 例急性咽炎進行雙盲試驗 :男 30 例, 女 20 例;年齡 18～ 56 歲 ,平均 33.4 歲;病程 1 d 4 例, 2 d 12 例 ,3 d 26 例, 4 d 2 例 ,7 d 6 例 ;將所有臨床資料編入觀察表, 采用隨機數(shù)字表法, 每個患者的觀察表編號與廠家提供的藥物編號一致 。另 50 例為開放試驗組 :男 33 例 , 女 17 例 ;年齡 21～ 69 歲 ,平均 33.1 歲 ;其中急性咽炎或伴牙齦炎或伴潰瘍 15 例, 慢性咽炎急性發(fā)作 10 例 ,病程 2 ～ 5d,作為急性咽炎組;慢性咽炎 25 例, 病程 3 個月～10 年,作為慢性咽炎組 ,兩組給同樣的已知治療藥。
        二、用藥方法

       采 用 美 國 雅 臣 藥 業(yè) 集 團 (Jason MedicalHoldings Inc .USA)和廣東省大日生物化學藥業(yè)有限公司聯(lián)合研制的用葡萄球菌 、溶血性鏈球菌 、流感嗜血桿菌 、大腸桿菌等多種革蘭陽性球菌、革蘭陰性桿菌和白色念珠菌免疫的雞蛋黃中提取的特異性IgY, 制成水溶性薄荷味噴霧劑(效價為 512), 口咽噴入 ,每日噴 6 次,每次 5 噴, 噴入時深吸氣, 噴藥后10 min 內(nèi)不飲水 , 不進食, 連用 7 d ,不合用其他任何治療 ,安慰劑除不含 IgY 外與治療藥在劑型 、成分、顏色 、氣味 、包裝上完全相同, 治療藥與安慰劑由制藥公司采用隨機數(shù)字表法編號 , 該編號與受試病例編號一致。以癥狀、體征記分的方法評價療效 ,急性咽炎治療 3 d 后如癥狀無改善或加重者視為無效, 并加用抗生素治療。試驗結(jié)束后評價療效 ,隨機雙盲試驗由制藥公司和參加試驗單位一起開盲分組, 進行統(tǒng)計學處理 。開放試驗的目的是比較急慢性咽炎的療效差別, 制藥公司 、參加試驗的醫(yī)務(wù)人員和受試患者對藥物均知情 。

        三、記分辦法

1.癥狀 :咽痛重 2 分, 輕 1 分 ;咽干 1 分;咽異物感 1 分;痰多 1 分;其他(咳嗽 、咽癢 、自覺咽喉燒灼感等)1分 。

2.體征 :咽部急性充血 2 分 ,慢性充血 1 分;有分泌物 1 分;其他(如黏膜腫 、牙齦腫、潰瘍)1 分;體溫升高 2 分;外周血白細胞升高 2 分;細菌培養(yǎng)有致病菌生長 2 分 。

3.療效判斷標準 :治療后記分減少 5 分或以上者為顯效 ;減少 3 分和 4 分者有效 ;等于或小于 2 分者無效。

        四、特異性 IgY 體外抑菌活性

        取中山大學附屬第三醫(yī)院急性呼吸道感染患者分泌物中分離的 92 株細菌進行特異性 IgY 體外抗菌活性測定,采用平板二倍稀釋法 , IgY 效價分別為512 、256 、128 、64、32,質(zhì)控菌株購自中國軍事醫(yī)學科學院 。
        五、IgY 電泳分析

        取常溫保存和 55℃處理的 IgY 按效價 512 稀釋, 聚丙烯酰胺電泳,考馬斯亮藍染色 。

        六、統(tǒng)計學方法

        行列表的卡方檢驗 。

        結(jié) 果

1. 用藥后 2 d 開始起效 ,黏膜潰瘍用藥 3 d 后疼痛緩解 ,開放試驗組用藥前后癥狀體征變化詳見圖 1。按照上述療效判斷標準 ,用藥 7 d 后, 隨機試驗組中, 治療組總有效率84%, 安慰劑組總有效率
   
   

   圖1　開放試驗組 50 例急慢性咽炎特異性 IgY 治療前后癥狀、體 征出現(xiàn)率變化 28%,安慰劑組中病程 7 d者占 4 例 ,兩組療效比較 差異顯著(χ 2 =16.06 , P <0.01), 詳見表 1;開放試 驗組中, 急性組總有效率 96%, 慢性組總有效率 74%,兩組療效比較差異有顯著性(χ 2 =8.90 , P < 0.05),詳見表 2, 未發(fā)現(xiàn)毒副作用和過敏反應(yīng)。
   

   
   

   2.慢性咽炎抽查血常規(guī) 17 例, 無 1 例異常 ;急 性咽炎抽查 17 例,6 例(35.3%)外周血白細胞數(shù)高 于 10×10 9 / L 。
   

   3.咽拭子培養(yǎng) 25 例 ,培養(yǎng)出 4 株致病菌 ,2 株 金黃色葡萄球菌 ,2 株銅綠假單孢菌, 其中 1 株金黃 色葡萄球菌對特異性 IgY 敏感。特異性 IgY 體外 抗菌活性見表 3。
   

   4.特異性 IgY 電泳結(jié)果(圖 2):抗菌多克隆 IgY 具有 6條帶, 相對分子量約為 31 000 ～ 66 000 , 常溫和 55℃處理的標本帶形基本一致, 表明 IgY 耐 熱。
   

   
   

   
   

   
   

   
   

   注:MIC50 為 50%菌株被抑制的最小藥物濃度, MIC90 為 90%菌株被抑制的最小藥物濃度。 質(zhì)控菌:肺炎雙球菌(ATCC49619)效價 256, 金 黃 色 葡 萄 球 菌(ATCC29213)效 價 512, 大 腸 桿 菌(ATCC25922)效價 512

   討 論

   　　早在 60 年代就發(fā)現(xiàn)雞卵黃中存在免疫球蛋白G 抗體(IgG), 它是母雞受抗原刺激后所產(chǎn)生的IgG ,在卵黃成熟期選擇性地從血清中轉(zhuǎn)移到卵黃(Yolk)內(nèi) ,因此又稱 IgY,是卵黃中惟一的一類免疫球蛋白[ 1]含量與雞血清中的 IgG 相近。后來的研究發(fā)現(xiàn),用病毒或細菌免疫母雞后特異性 IgY 的含量顯著增高, 達到 9.4mg/ml 雞蛋黃[ 2]但由于脂質(zhì)體的影響, 當時分離純化 IgY 很困難 。1980 年P(guān)olson 等 [ 3] 首先發(fā)現(xiàn)用 3.5 %聚乙二醇可將卵黃蛋白與脂質(zhì)體分離后, 近 20 年來 IgY 的研究已取得了很大的進展[ 4 , 5]。特別是在免疫治療方面, 由于雞抗體耐酸[ 6]耐熱 [ 2] ,性能穩(wěn)定 ,不激活補體, 不與哺乳動物 Fc 受體結(jié)合 [ 7] , 因此不會導致由此引起的炎癥反應(yīng) , 可局部應(yīng)用預(yù)防或治療口腔[ 8 , 9]或上呼吸道感染 。體外試驗表明相應(yīng)的 IgY 對腸道致· 114 ·中華耳鼻咽喉科雜志 2004 年2 月第 39 卷第 2 期　Chin J Otorhinolaryngol, February 2004, Vol 39, No .2病菌有抑制作用 [ 10] , 因此也可用于預(yù)防或治療胃腸道感染[ 2, 7]。特別是 Sarker 等[ 11]采用抗輪狀病毒雞卵黃免疫球蛋白口服, 治療嬰兒輪狀病毒感染所致腹瀉, 獲得了令人鼓舞的結(jié)果, 為 IgY 的臨床應(yīng)用提供了直接的證據(jù), 但 IgY 的合適治療劑量和抗體中和滴度的確定卻是沒有解決的問題 。我們根據(jù)92 株致病菌體外試驗結(jié)果確定了 IgY 的有效治療量,其效價不能低于 512
   

          急性咽炎和慢性咽炎急性發(fā)作主要表現(xiàn)為咽痛和咽充血 ,感染是其直接原因 ,常規(guī)治療以全身抗感染為主。慢性咽炎癥狀多樣, 病因復(fù)雜 ,無論慢性單純性咽炎 、慢性肥厚性咽炎還是萎縮性咽炎, 局部黏膜感染性炎癥仍然是其主要病理特征, 治療方法雖然很多 ,但效果均不佳。本研究采用的口腔噴霧劑的有效成分是針對多種咽喉常見致病菌的多克隆抗體 IgY ,其抗菌機理是 IgY 與致病菌特異性結(jié)合后細菌表面結(jié)構(gòu)改變, 阻斷了細菌與人體細胞的黏附 ,細菌與宿主的物質(zhì)交換受到影響 ,導致細菌生長抑制,這是特異性 IgY 的直接作用;同時細菌表面構(gòu)象和(或)細胞膜電場的改變類似于免疫調(diào)理作用 ,便于宿主白細胞和巨噬細胞吞噬細菌, 這是特異性IgY 的間接作用。IgY 體外抗菌活性測定結(jié)果證實對常見致病球菌如金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎雙球菌、A 群溶血性鏈球菌、腸球菌等有一定的抗菌作用, 其中以對肺炎雙球菌、A 群溶血性鏈球菌抗菌活性最佳, 對卡他莫拉菌 、流感嗜血桿菌和標準菌株大腸桿菌亦有一定作用, 對其他球菌如本組培養(yǎng)出的一株耐藥金黃色葡萄球菌也有部分抑制作用 ,但對其他革蘭陰性桿菌均沒有抗菌活性 。體外實驗只反應(yīng)了 IgY 的直接抑菌作用, 而在體內(nèi)應(yīng)用則具有上述雙重作用。Carlander[ 12]最近研究發(fā)現(xiàn), 19 例自愿受試者晚上用 IgY 溶液含漱 1 ～ 2min,第 2 日上午 18 例還能從唾液中檢測到活性抗體,表明 IgY 可在局部滯留較長時間 。本組 50 例急性咽炎, 隨機雙盲研究結(jié)果顯示 IgY 治療的總有效率達到 84%, 遠高于安慰對照(28 %), 也高于開放試驗組中慢性咽炎的總有效率(74%), 提示特異性 IgY 對咽喉部急性細菌感染性黏膜炎癥療效較好。而且我們發(fā)現(xiàn)用藥 3 d 后隨咽部炎癥控制 ,外周血白細胞也跟著下降 。但值得一提的是, 無論雙盲試驗還是開放試驗, 急性咽炎治療的顯效率分別也只有 32%和 56%,因此對于較嚴重感染的患者則只能作為輔助治療藥物 。安慰組有效率較高 , 其中4 例就診時已患病 7 d ,我們考慮可能系自然病程的影響 。

               特異性 IgY 是針對致敏的致病菌的 ,因此長期使用一般不會影響正常菌群生長。 正如 Sarker等 [ 11] 所指出的, 我們每日都吃雞蛋 , 口服 IgY 是安全的 ,本組 100 例隨訪至今尚未發(fā)現(xiàn)任何毒副作用及過敏反應(yīng)。肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和卡他莫拉菌是成人慢性支氣管炎急性發(fā)作和膿痰的常見病因, 本研究采用的特異性 IgY 對這些細菌敏感 , 我們在對伴發(fā)急性咽炎的這類患者應(yīng)用該藥治療過程中發(fā)現(xiàn)患者咳嗽和膿痰很快控制 , 是否可作為輔助治療藥物尚待擴大病例進一步證實。

參 考 文 獻

1 Loeken MR, Roth T F.Analysis of maternal IgG subpopulationswhich are transported into the chicken oocyte.Immunology , 1983,49:21-28.

2 Shin JH, Yang M , Nam SW, et al.Use of egg yolk-derivednoglobulin as an alternative to antibiotic treatment for controlof Helicobacter pylori infection.Clin Diagn Lab Immunol, 2002, 9:1061-1066.

3 Polson A , von Wechmar MB, van Regenmortel MH.Isolation ofviral IgY antibodies from yolks of immunized hens.ImmunolCommun, 1980, 9:475-493.

4 Gutierrez Calzado E, Garcia Garrido RM , Schade R.Humanhaemoclassification by use of specific yolk antibodies obtained afterimmunisation of chickens against human blood group antigens.Altern Lab Anim, 2001,29:717-726.

5 Tini M , Jewell UR, Camenisch G , et al.Generation andapplication of chicken egg-yolk antibodies.Comp Biochem Physiol AMol Integr Physiol, 2002, 131:569-574.

6 Lee KA, Chang SK , Lee YJ, et al.Acid stability of anti-Helicobacter pyroli IgY in aqueous polyol solution.J Biochem M olBiol, 2002, 35:488-493.

7 Carlander D , Kollberg H, Wejaker PE, et al. Peroralimmunotherapy with yolk antibodies for the prevention andtreatment of enteric infections.Immunol Res, 2000, 21:1-6.

8 Hatta H, T suda K , Ozeki M , et al.Passive immunization againstdental plaque formation in humans:effect of a mouth rinsecontaining egg yolk antibodies (IgY) specific to Streptococcusmutans.Caries Res, 1997, 31:268-274.

9 Smith DJ, King WF , Godiska R. Passive transfer ofimmunoglobulin Y antibody to Streptococcus mutans glucan bindingprotein B can confer protection against experimental dental caries.Infect Immun, 2001, 69:3135-3142.

10 Lee EN , Sunwoo HH, Menninen K , et al.In vitro studies ofchicken egg yolk antibody (IgY)against Salmonella enteritidis andSalmonella typhimurium.Poult Sci, 2002, 81:632-641.

11 Sarker SA , Casswall TH, Juneja LR, et al.Randomized, placebo-controlled, clinical trial of hyperimmunized chicken egg yolkimmunoglobulin in children with rotavirus diarrhea.J PediatrGastroenterol Nutr, 2001, 32:19-25.

12 Carlander D, Kollberg H, Larsson A.Retention of specific yolkIgY in the human oral cavity .Bio Drugs, 2002, 16:433-437.

(收稿日期:2003-05-13)

(本文編輯:何膺遠)