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段琳，趙文鋒，丁建坤，吳梧桐，劉景晶

(中國藥科大學生命科學與技術學院，江蘇南京210009)

摘要：卵黃抗體(IgY)是禽類產生于血清中的免疫球蛋白，并在其受體介導下轉移到卵黃中提供給新生個體被動免疫。IgY因其制備簡單、成本低、可規(guī)模化生產，已被開發(fā)成功能食品、保健品、消毒劑等；診斷與治療性lgY也將在臨床上得到廣泛的應用。

關鍵謁：卵黃抗俸：開發(fā)；I恪床應用

中圖分類號：TQ464．7

文獻標識碼：A

文章編號：1005-167812010)03旬212-04

The present development status and application perspective ofegg-yolk antibody(IgY)

DUAN Lin，ZHAO Wen-feng，DING Jian-kun，WU Wu—tong，LIU Jing-jing

(School of L譫Science and Technology，China Pharmaceutical University，Nanjing，2 1 0009，China)

卵黃抗體(IgY)又稱卵黃免疫球蛋白，在特異性抗原刺

激下由禽類B淋巴細胞產生并轉移到卵黃中的多克隆抗體。lgY以其性質穩(wěn)定、特異性強、制備簡單、成本低、可規(guī)模化生產而倍受關注。目前已有大量添加lgY的產品如發(fā)酵酸奶、功能性食品、衛(wèi)生消毒產品及化妝品等上市銷售。lgY應用于醫(yī)療診斷及治療通過臨床驗證也顯示出良好效果。lgY的應用范圍不斷擴大，可以作為親和配基，催化抗體等。本文就IgY的作用機理、開發(fā)現(xiàn)狀、臨床應用進行綜述。

l

IgY及其作用機理

IgY是由特異性抗原免疫禽類，產生于卵黃中的_y免疫球蛋白。1893年Klemperer用試驗首次證明特異性抗原免疫雞后?？贵w會轉移到卵黃中。Leslie和B．Clemlgy(1969)提出卵黃中的抗體以IgY表示。20世紀80年代以來IgY開始廣泛應用，lgY技術即lgY的制備和應用也逐漸成熟。IgY的制備包括選擇抗原、佐劑、免疫方案(抗原劑量、免疫方式、次數(shù)和間隔期等)以及IgY的分離、純化與儲存。在實際應用中．19Y被制成卵黃粉或精制成抗體注射液。

lgY在食品、醫(yī)藥、生物等方面的應用越來越廣泛，其作用機理逐漸被闡明和完善?？诜蘒gY已被證明能有效替代抗生索治療因耶爾森菌、腸毒性大腸桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、幽f】螺桿菌等感染引起的胃腸道疾病?？鼓c道細菌lgY

可能主要通過以下作用環(huán)節(jié)達到抗菌的作用?：特定病原菌

lgY能直接黏附于病原菌的細胞壁上，抑制病原菌的生長；

針對病原菌的菌毛和鞭毛lgY可黏附于細菌的菌毛和鞭毛

上，使病原菌不能黏附于腸道黏膜上皮細胞，妨礙其運動、游

走；一部分IgY在腸道消化酶作用下。降解為可結合片段，被

腸道吸收后進入血液能與特定病原菌黏附因子結合，使病原

菌不能黏附易感細胞而失去致病性。IgY也顯示較好的抗

真菌、抗病毒效果。白色假絲酵母菌是條件致病真菌，能夠

導致口腔和陰道黏膜感染?？拱咨俳z酵母菌lgY可與白

色假絲酵母菌特異性結合，抑制其游動、生長和繁殖；阻斷白

色假絲酵母菌黏附素與機體組織、細胞中的受體結合；在無

血清的環(huán)境中抑制白色假絲酵母菌生物被膜(biofilm)的形

成忙’；同時還能吸引巨噬細胞，加強吞噬作用，消除局部感

染，阻止病原的播散而達到治療目的¨1?？馆啝畈《韭腰S免

疫球蛋白主要是通過改變病毒表面的構型，阻止病毒吸附于

機體細胞以及增強巨噬細胞的吞噬作用H1。

2

IgY的開發(fā)現(xiàn)狀

美國、日本、德國等在IgY研究開發(fā)中處于領先地位。Gallus immunotech、GenWay、IGY等公司致力于lgY的開發(fā)研究，并獲得較為可觀的經濟效益和社會效益。美國雅臣藥業(yè)集團(JasonMedicalHoldings，lnc．USA)是全球第一個將IgY技術產業(yè)化、商品化的公司。該公司有關IgY技術的技術發(fā)明專利有27項，研發(fā)成功并商品化的IgY系列產品共有22種?！皧W麗汀健齒露”、“奧麗汀lgY免疫牙膏”、“免力快喉友噴劑”、“抗幽門桿菌和球菌復合IgY幽凈膠囊”等已經投放市場并大量銷售。國內lgY的研究開發(fā)也處于國際上較為領先的水平。湖南安邦制藥有限公司主持的“卵黃抗體技術(IgY系列產品)深度開發(fā)”是2009年長沙市的重點項目之一，同時該公司引進國外IgY生物抗體技術，生產婦科用“瑞麗女人抑菌丹”第二代產品，開創(chuàng)了國內首家應用IgY生物制劑的綠色療法治療預防婦科疾病?！疤禺愋钥笴A IgY

萬方數(shù)據(jù)

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新瓔制劑的研發(fā)與應用”是南昌大學產業(yè)化項目，已經對特

異性抗CA lgY泡騰片的藥效作用，進行了臨床前研究，并已

申請專利”J。大連賽姆生物工程技術公司的研究項目“l(fā)gY

在疾病防治方面的應用”已完成中試。目前，大量lgY已經

商品化。

2．1合lsY的功能性食品和保健品

美國食品和藥品管理局(FDA)認為，lgY作為功能食品

比作為藥物更有利，并將其列人“一般公認安全物質(Gen．

erally Accepted As Safe)”范疇，因此如同每日飲用牛奶一

樣，消費者可放心食用卵黃抗體。lgY可以添加到嬰幼兒、

中老年人的食品中，提高人體對各種疾病的抵抗力。用幽門

螺桿菌的致病物質尿酶免疫雞制備lgY，經65℃巴氏消毒

30 min后添加到含有雙歧桿菌和乳酸桿菌的酸奶中，終濃度

為1％。對42名經”c尿素呼氣試驗(UBT)確認為感染幽

門螺桿菌的患者服用該酸奶，每次150 mL(含lgY-尿酶15

mg)，3次／d，持續(xù)4周。試驗組與未服用前相比UBT降低

了39．33％，對照組即沒有添加IgY的酸奶服用組與未服用

前沒有明顯的差別【6 J。這種新型的酸奶作為營養(yǎng)食品已被

開發(fā)進行大規(guī)模的生產，已在日本、中國臺灣、韓國等地

上市。

臺灣華肝醫(yī)藥股份有限公司以專業(yè)化養(yǎng)雞生產平臺，成

功開發(fā)4種含有IgY的功能性食品：腸病毒71型IgY抗體、

常見腸道致病菌lgY抗體、引起蛀牙的轉糖lgY抗體及綠膿

桿菌lgY、引起消化性潰瘍的幽門螺桿菌IgY抗體。

江西中德聯(lián)合研究院與葫蘆島愛克生物工程有限公司

運用現(xiàn)代免疫生物工程技術．從經輪狀病毒免疫雞卵黃中提

取并純化的多種生物活性因子，采用冷凍干燥等工藝生產的

純天然口服抗輪狀病毒免疫球蛋白(商品名“百貝寧”)，從

2001年七市到現(xiàn)在，經臨床試驗發(fā)現(xiàn)“百貝寧”治療輪狀病

毒性腸炎療效顯著，服用方便，治療過程中未發(fā)現(xiàn)毒副作

用‘”。

2．2舍IgY的消毒產品

美國雅臣藥業(yè)集團和廣東省大日生物化學藥業(yè)有限公

司聯(lián)合研制的用金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、B2溶血性

鏈球菌、G簇溶血性鏈球菌、肺炎球菌等細菌復合抗原免疫

的雞蛋黃中提取特異性IgY，制成水溶性薄荷味噴霧劑(效

價為512)(商品名：喉友口腔抗菌液)，用于口腔和咽喉的

消毒。施建絨埔1將160例過敏性鼻炎患者隨機分為試驗組

和對照組，試驗組每日用喉友口腔抗菌液噴鼻，對照組用抗

組胺藥和雷諾考特鼻噴劑治療。結果表明，用“喉友口腔抗

菌液”對過敏性鼻炎的總有效率達到86．25％。

還有添加lgY用于預防齲齒的“貝可麗健齒”噴劑以及

針對消滅或抑制各種導致婦科感染性疾病的細菌和霉菌的

“維潔斯”TM潔陰抑菌泡沫劑等消毒產品也已上市銷售。

2．3基于IgY的分離檢潮試荊盒

人血漿成分復雜，含有上萬種蛋白質，其中自蛋白

(HSA)、IgG等12種高豐度蛋白占到了血漿總蛋白的90％

以上。高豐度蛋白的存在，影響血漿中一些低豐度蛋白的檢

出，而這些低車度蛋白很可能是疾病治療的靶標和診斷的標

志。獲得HSA和IgG的特異性IgY。偶聯(lián)于金磁微粒表面。

加入人血漿樣品后，99％以上的抗體固定在金磁微粒表面，

取上清進行SDS—PAGE檢測，該金磁微?？捎行У娜コ獫{

中大部分高豐度蛋白HSA及IgG—J。貝克曼庫爾特公司利

用此技術開發(fā)出lgY蛋白質組份分離試劑盒：Proteome Lab

lgY．12和ProteoineLab lgY—R7，分別用于從人及其他靈長類

體液和嚙齒動物體液中分離高豐度蛋白。GenWay是全球處

于領先地位的lgY抗體研發(fā)、生產和銷售公司，提供大量雞

抗體產品，特別是提供基于IgY的El。ISA各種試劑盒，用于

分析血漿和血清樣品以及藥物靶標的發(fā)現(xiàn)。

2．4其他產品

將IgY添加到化妝品中可抵制多種細菌和病毒，消除主

要細菌引起的痤瘡，保護皮膚，如韓國“Acfine”系列產品。

還有將IgY添加到牙膏及口香糖中，預防和治療齲齒。

3臨床診斷和治療性IgY

3．1診斷性IgY

IgY具有不與金色葡萄球菌A蛋白和鏈球菌G蛋白相

結合，不與哺乳動物Fc受體、類風濕因子結合，不與人抗或

鼠抗體交叉反應，不激活補體等特點。由于禽類和人親緣關

系較遠，種系差別大，使得lgY在檢測診斷上具有穩(wěn)定性、特

異性和靈敏度高、免疫干擾小、背景低等優(yōu)點。因此，lgY已

應用于瓊脂擴散試驗、乳膠凝集試驗、熒光免疫試驗、ELISA、

免疫組化、膠體金標記等免疫學試驗以檢測病毒、細菌、寄生

蟲感染以及心血管疾病和癌癥。

3．1．1

病毒引起疾病的診斷 史繼靜等¨馴用純化的編碼

HIV·lgag p7、p6的前體蛋白NCpl5免疫蛋雞，制備的IgY具

有較強的免疫反應性，能夠與HIV·l病毒蛋白NCpl5特異

性結合，從而為HIV·1診斷試劑盒開發(fā)及HIV-1實驗研究奠

定基礎。核衣殼(NP)是SARS病毒的主要結構蛋白，病人

感染1周后，在病人的血漿和鼻明呼出物中大量出現(xiàn)。通過

克隆NP，免疫雞獲得NP特異性抗體，用于免疫檢測分析，對

NP的檢出限是10 pg／mL，是所用檢測方法中最敏感的?1。

以3種滅活的天花病毒(vaccina virus，calpox virus和cowpox

virus)為免疫原，分別免疫注射3組實驗蛋雞制備抗體。用

特異性的IgY與磁珠結合，并在模擬樣本中用于天花病毒的

PCR檢測，可達到純化病毒、增強實驗敏感度的效果¨“。楊

軍等¨川制備出針對乳頭瘤病毒16 Ll蛋白(human papillo·

mavirusl6

type

L1 main

capsid protein，HPVl6 LI)的高效價特

異性lgY，可用于HPVl6LI蛋白的細胞學檢測，為IgY抗體

在免疫組織化學檢驗中的應用提供實驗依據(jù)。

3．1．2血吸蟲病的診斷血吸蟲病是一種嚴重危害人類健

康的人獸共患寄生蟲病。以日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(

SEA)免疫海南蛋雞。制備IgY。以雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附

試驗(S-ELISA)法，檢測急、慢性血吸蟲病病人和健康人血

清，并與常規(guī)檢測抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗法(NEA-ELISA)

做比較顯示S-ELISA法檢測急性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽

性率為100％，慢性血吸蟲病人循環(huán)抗原的陽性率為

萬方數(shù)據(jù)

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84，4％，健康人的特異性為96％【l”。同時顯示兩種方法血

吸蟲病的檢出率差異無統(tǒng)計學意義。Lei等¨糾采用基于lgY

的免疫磁珠ELISA反應檢測血漿中的循環(huán)抗原的量也可以

用來評價采用吡喹酮治療后的效果。

3．1．3用于心血管疾病的診斷研究表明內源性畦巴因

(ouabain)與多種心血管疾病密切相關。但是。由于哇巴因

在機體內的含量極低，在正常人血漿中含量甚微，目前多選

用放射性免疫檢測，存在放射性污染和試劑昂貴的缺點。利

用鳥類和哺乳動物的種系差別較大，將哇巴因．牛血清白蛋

白耦聯(lián)物免疫蛋雞制備IgY。可對哇巴因進行檢測。結果表

明雞抗體lgY比兔抗體IgG的檢測特異性、準確性均高，在

一定程度上提高了哇巴因檢測水平¨“。

3．1．4用于癌癥的診斷HER2和端粒酶是乳腺癌診斷的

標志因子，用HER2和端粒酶免疫母雞產生抗HER2和端粒

酶的卵黃抗體代替哺乳動物多抗進行檢測，與哺乳動物的

lgG和IgM相比，IgY更加靈敏¨”。Xiao等【1引構建了IgY和

單壁碳納米管(SWNT)復合物HER2 IgY—SWNT，其結合了

SWNT的共振拉曼散射及在700一l

100

nm近紅外范圍內很

強的吸收特征和IgY的特異性、敏感性，在體外能夠專一性

檢測和光熱消融破壞HER2標志的乳腺癌細胞，有望成為新

的癌癥檢測和治療手段。

3．2處于臨床研究階段的治療性IgY

口服lgY用于被動免疫治療，具有廣闊的前景。目前多

數(shù)尚處于臨床前和臨床研究階段。其中最成功的是治療囊

性纖維化病(CF)lgY已完成II期臨床試驗，進入Ⅲ期臨床。

慰17名瑞典病人口服抗銅綠假單胞菌IgY進行長達12年

的稿床治療硅示出其具有良好的作用，而且口服對肺功能沒

有影響，病人的體重指數(shù)值接近正?！?9]。Nilsson等Ⅲ1通過

觀察1個口服lgY 10多年的臨床病例指出長期口服特異性

抗銅綠假單胞菌lgY進行免疫治療有效且沒有任何的副作

用?？广~綠假單胞菌[gY能夠阻止銅綠假單胞菌的感染，但

存在全菌抗原和其他的細菌的交叉反應，有町能降低lgY的

治療效果。以抗假單胞菌鞭毛抗原免疫獲得IgY能夠降低

假蕈胞菌的黏附，使病人的感染率和對抗生素的依賴降低，

同時抗鞭毛蛋白IgY也可以降低鞭毛蛋白引起的cF病人的

炎癥反應”“。

采用低分化腺胃癌的P1lO癌蛋白作為抗原免疫SPF

雞，從卵黃中提取抗體IgY作為蓖麻毒蛋白的導向載體制備

IgY·Ricin A。能夠選擇性地識別胃腸道系統(tǒng)腫瘤．誘導腫瘤

細胞的程序性死亡，最終殺死腫瘤細胞。IgY-Ricin A現(xiàn)已獲

國家發(fā)明專利‘22]。

4

lgY的其他應用研究

IgY是一種較為理想的催化抗體舊“。采用過渡態(tài)類似

物4一(羥基(2-萘氧基)磷?；?丁酸(HNPBA)為半抗原，和

BSA偶聯(lián)為全抗原免疫雞，制備IgY，以乙酸-2一萘酯為底物

驗證其催化活性，測得Kcat／Kuncat一2×104。顯示IgY具有

較高的催化活性。IgY用胰蛋白酶消化后，其(Fab’)片段的

催化活性與lgY相似。IgY還可以作為親和配基，用于分離

純化抗原。將純化后的抗BSA特異性IgY為介質親和分離

胎牛血清中的BSA，分離后的BSA純度可達電泳l條帶，明

顯高于市售產品‘圳。

目前對于lgY的規(guī)模化生產和臨床應用，還有許多問題

尚待解決，如生產工藝的穩(wěn)定性、質量標準的制定、口服lgY

在體內的動力學研究、口服制劑在胃腸道中的穩(wěn)定性等。隨

著對lgY研究的不斷深入和IgY生產技術的發(fā)展，IgY的應

用前景將越來越廣闊，有可能成為一類新型的生化藥物。

參考文獻：

[1] 張紹蘭．雞卵黃抗體研究進展[J]．西南軍醫(yī)，2008，10(3)：

120．121．

[2] Fujibayashi T，Nakamura M。Tominaga A，ct

a1．Effects of

IgY

a·

gainst

Candida albicans and Candm

spp．adherence

and biofilm

formation[J]．Jpn J Infect Dis，2009，62(5)：337-442．

[3] 陳曉勇，丁務高．傅穎媛，等．抗白色假絲酵母菌IgY的應用研

究[J]．中國實用婦科與產科雜志，2007，23(12)：929-93I．

[4] 鄭平，孫先軍，郭字紅，等．抗輪狀病毒免疫球蛋白治療嬰幼兒

輪狀病毒腸炎療效觀察(J]．中國婦幼保健，2007。22(29)：

4108-4109．

[5]傅穎嬡．特異性抗白色念珠菌IgY泡騰片：中國，CN20061003—

1562．8[P]．2007-6-20．

[6]Hofie K，Hofie N，Abdou A M。et a1．Suppressive

effect of function·

at drinking yogurt

containing specific egg yolk immunoglobulin

on

helicobacter

pylori

in

humans[J]．J Dairy Sci，2004，87(12)：

4073-4079．

[7] 王永明．百貝寧治療要幼兒輪狀病毒性腸炎療效觀察[J]．中

國實用醫(yī)藥。2008，3(19)：92．

[8] 施建絨．卵黃免疫球蛋白lgY治療過敏性鼻炎80飼[J]．實用

醫(yī)學雜志，2009，25(8)：1307—1308．

[9] 林芳，黃建新，陳超，等．雞卵黃抗體的制備以及金磁微粒為載

體去除人血漿部分高豐度蛋白的研究[J]．細胞與分子免疫學

雜志，2008，24(7)：706-709．

[10]史繼靜。韓莉，劉朝奇，等．HIV一1 NCpl5基因的克隆、蛋白表

達及雞卵黃抗體的制備[J]．食品科技，2008，34(3)：28-31．

[11]Kammilaa S，Dasa D，Bhatnagara

P

K。et

a1．A rapid point of ca∞

immunoswah assay for SARS—CoV detection[J]．J Virol Methods，

2008，52(1-2)：77斟．

[12]Zhang X Y。Kurth A，Pauly D，et a1．Application

of high·titred IgY

antibodies in orthopox virus diagnostics[J]．J Chin Pharm

Sei，

2008．17(3)：183-191．

[13]楊軍，張明娟，強磊，等．抗HPVl6LI IgY抗體的制備及活性檢

測[J]．南方醫(yī)科大學學報，2008，28(3)：324．327．

[14]吳最龍。張煒明，劉文琪，等．抗SEA雞卵黃抗體用于血吸蟲循

環(huán)抗原檢測的初步研究[J]．現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2008，8(12)：

2416-2418．

[15]Lei J H，Liu W Q，Sun c S，et a1．Detection of circulating antigen

in∞rllm of mice

infected with

Schistosoma』印口n論“m by immu—

nomagnetic head ELISA based on IgY[J]．Aeta Tropiea，2009，l l I

(1)：39-43．

[16]張明娟，楊軍，葛蘅，等．抗哇巴因雞蛋黃lgY與兔抗體Igc在

酶聯(lián)免疫檢測中的比較[J]．中國應用理學雜志，2007．23

萬方數(shù)據(jù)

中國生化藥物雜志Chinese Journal

of Biochemical Pharmaeeutics 2010年第3l卷第3期 215

(4)：505-507．

[17]Xiao Y．Gee X G，Gannot G。et a1．Quantitation of HER2 and

te·

lomerase biom¨kem in solid tumon with

lgY

antibodies and nai'lo-

crystal detection[J]．Int J Cancer．2008，122(10)：2175-2186．

[18]Xiee Y。Gao x G．Taratula 0．Anti．HER2 IgY antibody—functional·

ized sinOe-walled carbon nanotubos for detection and selective de-

strnction of breast cancer cells[J]．BMC Cancer。2009，9(1)：

351．

[19]Nilsson E，Larsson A，Olesen H V。et a1．Good effect oftgY against

Pseudomonas

aeruginosa infections

in

cystic

fibrosis

patients[J]．

Pediatr Pulmon01．2008．43(9)：892-899．

[20]Nilsson E，Kollberg H。Johannesson M，et al。More than 10 years’

continuous oral treatment with

specific immunoOobuGn

Y for the

prevention

of PseudomonoH

aeruginosa

infections：a case

report

[J]．J Med Food，2007，10(2)：375-378．

E21】Nilsson E．Characterization of lgY

for oral immunotherapy and

pre-

vention of PscudomoaaJ

aeruginosa

infections in

cystic

fibrosis

pa-

tients[D]．Uppsala：Department

of Medical Sciences，Clincal Che．

mistry，Akademiska Sjukhuset Uppsala University．2009．

[22】劉連瑞，王恢鵬，楊濤蘭。等．抗癌生物導向藥．免疫球蛋白Y．

植物毒蛋白A：中國，CN92111449．4[P]．1994-04．27．

[23]Ma

X H。Sun S

Q，Ma x M，et a1．Polycional antibodies from hen

egg yolk(19Y)with hydrolysis activity[J]．Protein J。2007，26

(7)：499-505．

[24]王山，許曉楠。包永明，等．應用卵黃免疫球蛋白作為親和配基

分離目的蛋白的研究[J]．離子交換與吸附，2003。19(2)：175一

179．